تحليل غذائي (العد الكلي للبكتريا Plate count


(جمال الدين عبد العظيم) #1

تقدير عدد الخلايا للبكتيريا بالعد بالأطباق Plate count :

حيث أن كل خلية حية تنمو لتكون مستعمرة واحدة فإنه يمكن استخدام الأطباق لعد البكتيريا في العينة تقديرياً .
يمكن استخدام طريقة العد بالأطباق وذلك بعمل تخفيفات للعينة ثم زراعتها في أطباق تحتوي على الآجار المتصلب بطريقة الأطباق المصبوبة spread plate method أو بطريقة الأطباق المنتشرة pour plate method , ثم تحضن الأطباق وبعد عملية التحضين تعد المستعمرات المتكونة في الطبق وتضرب في مقلوب التخفيف للحصول على عدد الخلايا البكتيرية في 1 مل من العينة .

تقدير العدد الكلي للبكتريا الهوائيةTotal Plate count

حيث نقل 1 مل من Plate Count Agar أستخدم لهذا الغرض الوسط الزرعي
التخافيف المناسبة الى طبق بتري بماصة معقمة ثم صب الوسط بعد تبريده الى درجة
حرارة 45 م وحركت الأطباق بهدوء لتجانس والتوزيع بشكل جيد وتركت تتصلب ثم
قلبت الأطباق وحضنت على درجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة وبعدها حسب عدد
البكتريا النامية بالاطباق.

Coli form Bacteria : تقدير عدد بكتريا القولون
للكشف عن بكتريا القولون حيث صب (MacConkey agar) أستخدم وسط
الوسط في الأطباق وترك يتصلب ثم وضع 1 مل من التخفيف المناسب على الوسط
ونشر على السطح بشكل جيد ثم صب فوقه طبقه اخرى من الوسط وذلك لتوفير ظروف
لا هوائية وتركت تتصلب الأطباق ثم قلبت وحضنت على درجة حرارة 37 م لمدة 24
ساعة وحسبت المستعمرات النامية على الوسط لتقدير عدد بكتريا القولون.

Staphylococcus aureus :
تقدير عدد بكتريا المكورات العنقودية الذهبية

Bacteria
إذ زرع كل تخفيف بثلاث أطباق تحتوي ،Baird Parker Agar أستخدم وسط
على الوسط وتم وضع في الطبق الأول 3 مل من التخفيف المناسب وفي الثاني 3.0
مل من التخفيف والطبق الثالث 4 مل من التخفيف ثم تنشر بشكل جيد ثم قلبت الأطباق
وحضنت على درجة حرارة 37 م لمدة 48 ساعة، وحسب عدد المستعمرات النامية في
الأطباق الثلاثة والتي تكون بشكل مستعمرات سوداء محاطة بهالة شفافة لتقدير عدد
المكورات العنقودية.

Salmonella Bacteria : فحص بكتريا السالمونيلا

10 على درجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة، وحضرت - تم حضن التخفيف 1
Tetrathionate Broth (T.T.H ) ثلاثة انابيب الأول يحتوي على 10 مل من وسط
وأضيف لكل انبوب 1 مل من التخفيف Selenite Cystine Broth والثاني يحتويٍ
على درجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة، اما وسط S.C.B. 10 ثم حضن وسط - الأول 1
فحضن على درجة حرارة 42 م لمدة 24 ساعة، وبعدها زرع 1 مل من كل T.T.H
ووسط X.L.D Agar انبوب في اطباق تحتوي على اوساط صلبة حيث استخدم وسط
وحضنت بدرجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة وبعد الحضن Hekton Entric Agar
لوحظت بكتريا السالمونيلا والتي تكون بشكل مستعمرات سوداء اللون وللتأكد من كونها
حاويا عى وسط Slant اجري لها فحص تأكيدي بزرعها على سلانت Salmonella
وحضنت على درجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة Triple Sugar Iron Agar (TSI)


(جمال الدين عبد العظيم) #2

تقدير العدد الكلي للبكتريا:
Pouring Plate تم تقدير العدد الكلي للبكتريا باستخدام طريقة الأطباق المصبوبة
لتقدير الحمل الميكروبي على وفق الطريقة الواردة في ( 6) برج العينة جيدا 25 Method
مرة لمجانسته وسحب 1مل من سلسلة التخافيف العشرية ووضعه في طبق بتري ثم إضافة
50 م – بدرجة حرارة 45 Standard plate agar الوسط الزرعي الخاص لتنمية البكتريا
وتحريك الطبق بصورة دائرية بعكس واتجاه عقرب الساعة وتركه ليتصلب ثم الحضن
بصورة مقلوبة بدرجة حرارة 37 م لمدة 24 ساعة وتم حساب عدد البكتريا باختيار الأطباق
300 وحساب عدد البكتريا في المليلتر الواحد - التي تراوح فيها عدد المستعمرات بين 30
بضرب معدل المستعمرات لطبقين بمقلوب التخفيف للحصول على العدد البكتيري معبرا عنها
بوحدة تكوين مستعمرة/مل