الكشف عن ميكروب السالمونيلاSalmonella
[COLOR=“Blue”][SIZE=“4”]يتبع الميكروب عائلة Enterobacteriaceae وبالتالي فالميكروب سالب لجرام , عصوي متحرك بالأسواط , أغلب الأنواع التابعة للجنس مرضية سواء للحيوان أو الإنسان . يسبب الميكروب بمختلف أنواعه التسمم الغذائي , إلا أن أشهر تلك الأنواع S. typhimurium , S. enteritides , S. newport .
الخطوات التقليدية لعزل والتعرف على السالمونيلا
أولاً : خطوات العزل والتعرف التقليدية على السالمونيلا :
1- الإنتشال (التقوية الأولية):- Pre - enrichment .
تختلف نوع بيئة الإنتشال المستخدمة حسب نوع المادة الغذائية ؛ حيث يستخدم مرق اللاكتوز Lactose Broth لعينات البيض , بينما يستخدم الماء المقطر المعقم المضاف إليه 0.45مل من صبغة Brilliant Green (تركيز 1٪) لعينات اللبن السائل والمجفف, أما عينات الدجاج فيستخدم لها مرق الصويا والتربتون Tryptone Soya Broth . يتم تحضين العينة مع بيئة الإنتشال على درجة 35ْم لمدة 24 ساعة .
2- العزل :- Isolation.
تنقسم عملية العزل إلى مرحلتين ,يتم في الأولى زرع 1مل من خطوة الإنتشال في بيئة Selenite Cystine Broth , أو Tetrathionate Brilliant Green Brothلتثبيط نمو الفلورا المصاحبة لميكروب السالونيلا Salmonella إن وجدت حيث يقوم الـ Seleniteكمادة انتخابية تثبط نمو الميكروبات عدا السالمونيلا , أما الـ L- Cystineفيشجع نمو ميكروب السالمونيلا , وهذه البيئة لا يتم تعقيمها في الأوتوكلاف حيث أن الحرارة العالية تختزل ملح الـ Seleniteويظهر هذا في صورة راسب أحمر اللون . أما في بيئة Tetrathionate Brilliant Green Broth فيتواجد كل من Sodium deoxycholate و Green Brilliantاللذان يعملان على تثبيط البكتيريا الموجبة لصبغة جرام.
يضاف إلى هذه البيئة كل من Iodine و Potassium iodideاللذان يعملان على تكوين الـ tetrathionateمن ملح Sodium thiosulphateوهذا المركب الأول يعمل على تثبيط الميكروبات المعوية الطبيعية , يتم التحضين في هذه المرحلة لمدة 24 ساعة على درجة حرارة 35ْم .
أما المرحلة الثانية فهي التخطيط على بيئات العزل الصلبة المتخصصة والتي تشمل مايلي :-
أ- Bismuth Sulphite Agar (BSA)وهي تحتوي على صبغة Brilliant Greenوملح Bismuth Sulphite اللذان يثبطان الفلورا المعوية السالبة والموجبة لصبغة جرام .
تعطي المستعمرات التابعة لـ S. typhi , S. entritides , S. typhimurium. لون أسود لامع ومحاطة بمظهر معدني لامع وذلك لإنتاج H2Sواختزال الـSulphiteإلى Ferric Sulphide .
إلا أن هذه البيئة في بعض الأحيان تثبط بعض السلالات التابعة لجنس السالمونيلا Salmonella.
ب- Xylose Lysine Deoxycholate Citrate Agar:- (XLD)
كما ذكرنا سابقاً أن الـ deoxycholateيثبط البكتيريا الموجبة لجرام . يتواجد الـ L-lysineكمصدر لإنتاج H2Sفي البيئة ويضاف اللاكتوز والسكروز إلى هذه البيئة لإنتاج وسط حامضي يمنع ميكروبات القولون من تحليل الحامض الأميني L-lysineمنتجة H2S.وتؤدي إضافة الـ Thiosulphateو الـ Citrate إلى ظهور المستعمرات باللون الأسود .
ج- Hektoen Enteric Agar:- (HEA)
يتواجد في هذه البيئة ثلاث مصادر للكربوهيدرات ( لاكتوز – سكروز – ساليسين ) للتفرقة بين الميكروبات المرضية المعوية . وترتفع في هذه البيئة أيضاً كمية الببتون Peptone لتقليل التأثير التثبيطي لأملاح الصفراء . تظهر المستعمرات بلون أسود كما في البيئات السابقة نظراً لوجود ملحيThiosulphateو Ammonium citrateضمن مكونات البيئة .
جدول يوضح المظاهر المورفولوجية للعزلات التابعة لجنس السالمونيلا Salmonella
على بيئات العزل المختلفة
البيئة
المظهر المورفولوجي للمستعمرات
BSA
تظهر مستعمرات السالمونيلا بلون أسود لامع (بعضها لا يعطي) . اللون حول المستعمرات يتغير من اللون البني للأسود بزيادة التحضين ليعطي ما يعرف بـ halo-effect .
XLD
مستعمرات السالمونيلا لها لون وردي مع وجود مركز أسود والسلالات الموجبة للاكتوز والسكروز تظهر بلون أصفر مع وجود مركز أسود ( بعضها لا يعطي )
HEA
تظهر المستعمرات بلون أزرق إلى أخضر مزرق مع وجود مركز أسود , السلالات الموجبة لتخمر اللاكتوز والسكروز ومجموعة الكوليفورم تعطي مستعمرات لها لون السالمونيلا .
الإختبارات التأكيدية لميكروب السالمونيلا :-
1- التفاعل في بيئتي Triple sugar iron agarو Lysin iron agar:-
يتم التلقيح على أسطح الأجار المائل في كلتا البيئتين وبعد التحضين تظهر المستعمرات التابعة لجنس السالمونيلاباللون الأحمر على السطح (تفاعل قاعدي) وبلون أصفر تحت الأجار (تفاعل حامضي) مع وجود لون أسود عند إنتاج H2S.
2- الفحص السيرولوجي (المناعي) :-
تؤخذ العزلات للتعرف عليها بالإختبارات السيرولوجية حيث يتم فحص 6 مستعمرات / 25جم عينة .
[/size][/color]