التحليل الغذائي (تقدير نسبة الكربوهيدرات )


(جمال الدين عبد العظيم) #1

ايجاد نسبة الكربوهيدرات
===============

[COLOR=“Blue”][SIZE=“4”]المتكون من ( النشا والسكر ) في العلف ومن الكربوهيدرات نستطيع ايجاد الطاقة التمثيلية للعلف .

المواد الكيميائية :ـ

1- 80% ايثانول في دورق حجمي 250مل ( 80مل ايثانول + 20 مل ماء مقطر ) .
2- 52% Perchloric acid
_______52× 100
%70 Perchloric

74.3مل في دورق حجمي 100 مل
-3 محلول 0.1% انترون ( (Anthroneفي 100 مل من ( 76% H 2S04 = 76مل H2S04 + 24 مل مقطر )
4- محلول جلوكوز قياسي ( 100ميكروجرام / مل )
يجفف الجلوكوز في الفرن ثم زن 0.1 جم من الجلوكوز واذابتها في 10مل ماء مقطر ثم يؤخذ منه 25ميكروليتر وتذاب في 250مل ماء مقطر .

الادوات :ـ
1- جهاز Spectrophotometer))
2- جهاز Centrifuge))
3- جهاز ( shaker)
4- ميزان حساس
5- انابيب خاصة لجهاز الطرد المركزي
6- حمام مائي على درجة حرارة C100
7- انابيب باغطية طولها 25سم
8- ورق ترشيح
9- اقماع

طريقة استخلاص السكر
1- وزن 0.2 جم – 0.3 جم من العينة في انبوب جهاز الطرد المركزي
2- اضافة 5 مل من الماء المقطر
3- اضافة 25مل من 80% ايثانول ساخن
4- رجة على الرجاج لمدة 10دقائق
5- وضعة في جهاز الطرد المركزي لمده نصف ساعة
6- اخذ الرائق ووضعة في كاس سعة 100مل
7- اضافة 30مل من الايثانول الساخن على الراسب ثم رجها لمدة 10 دقائق وبعدها توضع في جهاز الطرد المركزي لمده نصف ساعة
8- تأخذ الرائق ونضعه في الكاس السابق (6) ثم اخذ الراسب لتحضير طريقة النشا .
9- وضع الكاس المحتوي على السائل على حرارة هادئة حتى اختفاء رائحة الايثانول ويبقى تقريبا 10% من السائل
10- تكمله الحجم الى 100مل بالماء المقطر باستخدام دورق حجمي سعته 100 مل وترشيح العينة باستخدام قمع وورق الترشيح

لملاحظة تطور اللون الناتج وذلك من خلال اخذ انابيب الاختبار ووضع فيها

1- 1مل من سائل السكر + 1 مل من ماء مقطر + 10مل انترون
2- 2 مل من سائل السكر + 10مل انترون
3- (بلانك ) 2 مل ماء مقطر + 10مل انترون

غلي الانابيب لمده 12 دقيقة في حمام مائي درجة حرارته 100درجة مئوية تبريدها ثم قراءتها على جهازSpectrophotometer)) على طول موجه 630 وتسمى القراءه 0.D

طريقة النشا :ـ

1- اخذ الراسب الذي نتج من طريقة السكر واضافة عليه
5 مل من الماء المقطر
6.5 مل من Perchloric acid
2- رج العينة لمدة عشر دقائق ثم اضافة 20مل ماء مقطر
3- وضع العينة في جهاز الطرد المركزي لمدة نصف ساعة
4- اخذ السائل الرائق ووضعه في بيكر سعته 100مل
5- اعادة نفس الطريقة على الماده المترسبة
6- ووضع السائل الرائق في نفس البيكر السابق
7- تكملة الحجم الى 100مل بالماء المقطر وذلك باستخدام دورق حجمي سعته 100مل
8- ترشيح باستخدام القمع وورق الترشيح
9- اخذ 1 مل من السائل المرشح ووضعه في دورق حجمي سعته 25مل وتكمله الحجم بالماء المقطر حتى العلامة .

ولملاحظة تطور اللون الناتج وذلك من خلال اخذ

1- 1مل من سائل النشا + 10مل انترون + 1 مل ماء مقطر
2- 2مل من سائل النشا + 10 مل انترون
[/size][/color]

جهاز قياس الطيف

[COLOR=“Blue”][SIZE=“4”]يقوم جهاز قياس الطيف بتقدير الكربوهيـدرات والدهـون الكلـية الموجودة بالأطعمة

التفاعلات الكيميائية للكربوهيدرات

  1. اختبار موليش(( Molisch test

ضع حوالي (3 مل) من المادة الكربوهيدراتية مذابة في ماء مقطر في انبوب اختبار ثم أضف قطرتين من محلول الفا نافثو ل 20% وامزج جيدا ثم على جانب
جدار الأنبوبالمائل اسكب ببطء (1 مل) من حمض الكبريتيك المركز بحيث تنشأ طبقتين سائلتين في الانبوب ,عند وجود مادة كربوهيدراتية تظهر حلقة حمراء تتحول
الى اللون البنفسجي عند نقطة الاتصال بين الطبقتين , رج بلطف وحذر شديد ثم اترك الانبوب ساكناًلمدة دقيقتين ثم خفف بالماء المقطر يظهر راسب بنفسجي في الحال
عند وجود مادة كربوهيدراتية ويرجع اللون الناتج في هذا الاختبار الى تكوين ناتج تكاثف غير ثابت بين مركب الفورفيورال من المادة الكربوهيدراتية والكاشف
الفا نافثول

  1. اختبار التفحم(Charing test)

ضع حوالي ( 5و0)جم من المادة الكربوهيدراتية مع (5و0)مل من حمض الكبريتيك المركز في انبوب اختبار وسخن بلطف على لهب صغير يلاحظ حدوث
تفحم مع تصاعد غازات عبارة عن خليط من (ٍSO2,CO,CO2) ويرجع التفحم الى قدرة حمض الكبريتيك على نزع الماء من المادة الكربوهيدراتية
تفاعلات خاصة بالسكريات المختزلة
إن المواد الكربوهيدراتية التي تحتوي على مجموعة كربونيل نشطة سواء في صورة الدهيد او كيتون لها القدرة على اختزال محاليل بعض الايونات المعدنية ومنهـــــا :
• اختزال محلول فهلنج (Fehling)عند اضافة محلول فهلنج 1و2 الى محلول يغلي لمادة سكرية مختزلة يلاحظ اختزال محلول فهلنج بسرعة وإختفاء اللون الأزرق وظهور راسب احمر من أكسيد النحاسوز
• اختزال محلول بندكت (Benedict)
ضع في انبوب اختبار 2 مل محلول بندكت ثم اضف (5و0) مل من محلول السكر المختزل وضع الانبوب في حمام مائي لمدة دقيقتين نلاحظ ظهور
راسب اخضر بالانبوب يتحول للاصفر ثم الاحمر وذلك تبعا لكمية السكر المختزل• اختزال محلول بارفويد(Barfoied)
اضف في انبوب اختبار (3 مل )من محلول بارفويد الى (2مل )من محلول مخفف للسكر المختزل وسخن لمدة دقيقتين في حمام مائي يغلي –
يلاحظ حدوث اختزال لخلات النحاس (الداخلة في تركيب البارفويد ) ويظهر راسب احمر من اكسيد النحاسوز
• اختزال نترات الفضة النوشادرية
ضع (2 مل )من نترات الفضة النوشادرية ثم 1 مل من محلول السكر المختزل يلاحظ اختزال نترات الفضة ببطء ويصبح المحلول ذا لون بني او اسود وعند تسخين
الخليط في حمام مائي يتم الاختزال بسرعة وتتكون مرآة فضية على جدران الانبوب
• اختزال الاوزازون(Osazone)ضع في انبوب اختبار(2 مل )من(2و0 جم محلول الفينيل هيدرازين هيدوكلوريد مع 3و0 جم خلات صوديوم) ثم اضف (1و0 جم) من الجلوكوز
وسخن لمدة (20-30)دقيقة في حمام مائي واترك الأنبوب يبرد ببطء تلاحظ ظهور بلورات صفراء يمكن رؤيتها تحت المجهر لاحظ أن كلا من الفركتوز
والجلوكوز والما نوز تعطي نفس البلورات ذات الشكل الهندسي المعين وذلك لان التفاعل يتم بين ذرة الكربون (1-2) في جزيء السكر وباقي ذرات الكربون
في السكريات الثلاثة متشابهة
يلاحظ أن سكر اللاكتوز وسكر المالتوز يعطيان مشتقات (Osazones) ولكنها تذوب في الماء الساخن ولذلك لا تظهر إلا عند التبريد في حين
أن مشتقات Osazones)) مع السكريات الأخرى لا تذوب في الماء الساخن ولذا تنفصل عندما يكون المحلول ساخنا
اختبارات نوعية لبعض السكريات

  1. الجلوكوز :تأثير هيدروكسيد القلويات :عند تسخين الجلوكوز مع محلول (3%) من هيدروكسيد الصوديوم يلاحظ ظهور لون اصفر في باديء الأمر
    ويتحول إلى البني ثم الأحمر
  2. الفركتوز
    أ‌- اختبار الفورفيورال
    إن الدهيد الفورفيورال هو أحد نواتج هدم الفركتوز بالأحماض , ويمكن الكشف عنه بتمييز اللون الأحمر الساطع الذي يعطيه مع خلات الانيلين ولإجراء الاختبار أذب
    (3و0) جم من الفركتوز في (5) مل من محلول هيدروكلوريك مخفف بنسبة (3:1) واغلي لمدة دقيقة حيث يتحول المحلول إلى اللون البني الغامق والأبخرة
    المتصاعدة من الدهيد الفورفيورال تحول شريط من ورق الترشيح المبلل بخلات الانيلين إلى اللون الأحمر الساطع
    ب_ اختبار بينوف (Pinoff test)أذب (1و0) جم من الفركتوز في (10 مل) من الماء المقطر ثم أضف 10 مل من موليبيدات
    الامونيوم تركيز 4% ثم أضف قطرات من حمض الخليك الثلجي وسخن في حمام مائي لمدة 5 دقائق تلاحظ ظهور لون أزرق غامق
    ( الاختبار موجب في غياب الأحماض المعدنية )
    ج – اختبار سلوانوف
    أضف (5 قطرات ) من سكر الفركتوز إلى 4 مل من كاشف السلوانوف واغلي لمدة 20 ثانية فقط ثم برد يظهر لون احمر في الأنبوب
  3. الجالاكتوز
    اختبار بينوف
    أضف (1و0) جم من الجالاكتوز إلى 10 مل ماء مقطر واجعل السكر يذوب ثم أضف 10 مل من محلول (4%) موليبيدات امونيوم ثم أضف 4 نقط من
    حمض الخليك الثلجي وسخن في حمام مائي لمدة (10-)20 دقيقة يظهر لون ازرق باهت
    يعطي الجالاكتوز لون ازرق باهت بعد التسخين لمدة 10 دقائق وفي حالة الفركتوز يظهر اللون ازرق غامق بعد الغليان لمدة 5 دقائق فقط
    اختبار حمض (mucic)))
    في بوتقة من الخزف ضع حوالي ممل من محلول الجالاكتوز ثم اصف 5 نقط من حمض النيتريك المركز – بخر ببطء على حمام مائي حتى يقل حجم المحلول إلى
    حوالي 2 مل اترك البوتقة تبرد وبحيث لا تحرك من مكانها وافحص عن وجود بلورات بيضاء تظهر كراسب من حمض وهذا الراسب لا يذوب في الماء ولكن يذوب
    في القلويات ويعاد ترسيبة بإضافة حمض إلى المحلول .

اذا فالكربوهيدرات هي مركبات كيميائية عضوية تتكون من الكربون , والهيدروجين , والاكسجين . وتعتبر هذه المركبات من مصادر الطاقة في جسم الكائن الحي,
والمادة التركيبية لعضيات الخلية .

الصيغة العامة : x [CH2O]n , حيث n = من 3 الى 7 .
[/size][/color]